ABSTRACT
Los marcadores tumorales existentes (alfafetoproteína y gonadotrofina coriónica humana) son patrones indirectos y no están expresados en todos los tumores testiculares (TT) por lo que no permiten una confiabilidad absoluta. Por esto, creemos que la identificación de los genes involucrados en la iniciación y progresión de TT es importante. El estudio del genoma humano (GH) ha ayudado a la identificación de la mayoría de los genes supresores (GS) de tumores descubiertos (p53,VHL,APC,CDKN2,RB). Para lograr detectarlos, se identifican las regiones cromosomales con alta frecuencia de deleciones (AFD) y mediante su estudio sistemático se puede identificar si existen GS involucrados. El objetivo de este trabajo es el estudio del GH(alelotipificación) mediante la amplificación por PCR de secuencias de bases repetidas polimorfas, que se encuentran distribuidas a lo largo del GH. Se seleccionaron 50 casos de TT del tipo seminoma puro y se microdisecó DNA de tejido tumoral y normal en TT. Este material fue amplificado mediante PCR, posteriormente se amplificaron mediante primers conocidos, secuencias cromosómicas determinadas de los sitios cromosomales con altas frecuencias de LOH y MSI buscando zonas calientes. Después de identificadas las regiones hot del mapa cromosómico, se acotó el estudio a los cromosomas 5 y 12. Se utilizaron 12 marcadores, para franquear zonas específicas del 5 y 12, donde encontramos previamente la mayor frecuencia de LOH. Un completo estudio de alelotipificación de alta densidad en los diferentes tipos histológicos de TT permitió detectar una AFD y LOH en cromosomas 12 y 5, detectándose que 47 de 50 casos de seminoma presentan algún marcador con inestabilidad genética en estas zonas, un 78 por ciento de los tumores estudiados (38/50) presentan más de 3 marcadores con inestabilidad. Al franquear las regiones específicas, la frecuencia de inestabilidad (FI) aumenta significativamente en el brazo p de ambos cromosomas. A la luz de los resultados concluimos que existe una FI significativamente alta en los cromosomas 5 y 12, lo que sugiere que en alguna región cercana del brazo corto de estos, se puede encontrar algún GS. Este gen se encontraría posiblemente inactivo, dado que la FI aumenta al cercar el área, lo que hace pensar en un rol supresor. Este es el primer estudio que logra identificar las zonas de inestabilidad cromosomal más frecuentes del TT y ahora realizaremos el estudio de baja densidad con la intención de encontrar este gen.